RT-PCR試劑盒兩種測量方法的優(yōu)缺點(diǎn)介紹
點(diǎn)擊次數(shù)：1083 更新時(shí)間：2022-12-26
RT-PCR試劑盒以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。
應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入，再與HRP標(biāo)記的抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。
在RT-PCR試劑盒實(shí)驗(yàn)中，用直接法測定抗體，不能直接用酶符號(hào)測定抗體，然后直接加入底物。而要加酶標(biāo)抗抗體呢？
如果將酶符號(hào)應(yīng)用于待測抗體，直接法比經(jīng)典法更復(fù)雜，在探索符號(hào)條件時(shí)，不能保證抗體因誤操作而失活;酶標(biāo)二抗目前已較為常見，被規(guī)模化，購買后使用方便。如果你直接做好了，方法已經(jīng)優(yōu)化了，d一抗二抗顯色，總時(shí)間加起來，結(jié)果不會(huì)超過2到3小時(shí)。
RT-PCR試劑盒可以使用直接ELISA法，即抗體包板用來在抗原上標(biāo)記酶，然后顯色，這與直接方法相比，減少了一步的時(shí)間，縮短了時(shí)間。然而直接法和直接ELISA法各有優(yōu)缺點(diǎn)，其要求取決于實(shí)驗(yàn)的具體要求。
1、要檢測的抗體通常是免疫后產(chǎn)生的抗體。其中有免疫功能衰竭、抗體過少等因素存在。酶符號(hào)的使用存在許多不確定因素，如在使用酶符號(hào)之前無法測量效價(jià)的可能性，這會(huì)導(dǎo)致不必要的混淆。
2、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)中酶聯(lián)抗體與抗體結(jié)合后，ELISA試劑盒具有很強(qiáng)的信號(hào)放大作用，可使信號(hào)擴(kuò)增一千倍以上，適用于低抗體含量的測定。
3、直接酶標(biāo)記抗體在篩選出單克隆抗體后可以考慮，但測定系統(tǒng)的建立需要大量的工作。
